文献类型：期刊文章

作　　者：胡昕[1] 吕建新[1]

机构地区：[1]温州医学院细胞与分子生物研究所,浙江温州325035

出　　处：《温州医学院学报》

基　　金：浙江省卫生厅卫生科技重点项目(2002ZD009)。

年　　份：2006

卷　　号：36

期　　号：4

起止页码：313-316

语　　种：中文

收录情况：CAS、IC、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的:探讨和分析SK-N-SH细胞中β-actinmRNA的半衰期。方法:建立包含β-actin基因片断的pMD-T载体的梯度稀释曲线,应用VIC标记的Taqman-MGB探针进行检测,用Opticon2.02软件分析结果。以不同浓度和不同时间的放线菌素D阻断SK-N-SH细胞转录,提取总RNA并予荧光定量RT-PCR检测β-actinmRNA。结果:SK-N-SH细胞中β-actinmRNA的半衰期为4h。与未处理组相比,4h组β-actin的拷贝数差异有显著性(P<0.05),12h和24h组β-actin拷贝数差异有极显著性(P<0.01)。不同浓度之间放线菌素D对β-actin拷贝数的影响差异不大(P>0.05)。结论:应用实时荧光定量RT-PCR,通过比较mRNA与总RNA的拷贝数,建立了一种准确方便地检测mRNA衰减的方法。同时β-actin不适合做放线菌素D处理实验中的内参照。

关 键 词：实时荧光定量 SK-N-SH Β-ACTIN MRNA 半表期  放线菌素D

分 类 号：Q291] R329.2]