文献类型：期刊文章

作　　者：王庆旭[1] 毛旭虎[1] 邹全明[1] 曾韦锟[1] 罗萍[1] 程建平[1] 易勇[1] 马颖[1]

机构地区：[1]第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室暨重庆生物制药工程技术研究中心,重庆400038

出　　处：《中华微生物学和免疫学杂志》

基　　金：军队杰出人才基金资助项目(04J009)

年　　份：2006

卷　　号：26

期　　号：6

起止页码：535-538

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的通过DNA重组技术表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7的EspA蛋白,并分析其免疫学性质。方法采用PCR技术从EHEC O157:H7基因组中扩增espA基因,T／A法克隆,连接至pET-28a(+)载体上,转化宿主细胞E．coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,亲和层析法纯化目的蛋白, SDS-PAGE测定其相对分子质量,同时分析其N端氨基酸序列,免疫家兔鉴定其抗原性。结果重组espA基因片段的测序结果与GenBank上基因序列只有1个碱基不同,一致性为99．83％,所编码的氨基酸序列没有改变。重组EspA蛋白在工程菌中以包涵体的形式表达,表达量约30％。免疫家兔所得抗体滴度为1:32。结论构建高效表达EspA蛋白的重组载体pET-28a(+)-espA,表达的蛋白具有良好的免疫原性,为进一步制备亚单位疫苗奠定基础。

关 键 词：EHEC O157:H7 espA基因表达  DNA重组

分 类 号：R378]