文献类型：期刊文章

作　　者：赵霞[1]

机构地区：[1]青海大学医学院组织胚胎学教研室,青海西宁810001

出　　处：《农业科学研究》

基　　金：青海大学医学院基础医学部资助项目

年　　份：2006

卷　　号：27

期　　号：2

起止页码：15-19

语　　种：中文

收录情况：普通刊

摘　　要：构建青海花斑裸鲤肝胰腺组织的cDNA文库并鉴定文库质量．提取青海花斑裸鲤肝胰腺组织总RNA，利用SMART（switching mechanism at 5’end of RNA transcript）技术，使用含有SfiIB酶切位点的oligo（dT）引物和含有SfiIA酶切住点的SMART IVTM寡核苷酸，在PowerScriptTM逆转录酶作用下，运用mRNA5’末端的模板转换方法合成cDNA第一链,利用LDPCR（long-distance PCR）扩增双链cDNA，经SfiI（IA和IB）酶切后，通过CHROMA SPIN-400柱进行分级分离去除〈500bp的片段，再同经SfiI酶切的）,Trip IEx2载体连接，体外包装后转染到大肠杆菌XL1-Blue宿主菌中，进行文库滴度和重组率的测定，然后扩增文库并随机挑取30个噬菌斑进行PCR反应鉴定插入片段大小．构建的cDNA文库滴度为1．8×10^6pfu／mL，重组率〉98％，文库扩增后滴度达8×10^9pfu／mL，插入片段长度在0．37～3．5kb之间，平均长度为1．56kb．文库具有良好的质量，为进一步筛选、克隆青海花斑裸鲤肝胰腺组织特异表达基因奠定了基础．

关 键 词：CDNA文库 青海裸鲤  肝胰腺组织  SMART

分 类 号：S965.116]