文献类型：期刊文章

作　　者：明志君[1] 肖淑宁[1] 陈永井[1] 施勤[1] 张学光[1]

机构地区：[1]苏州大学生命科学院医学生物技术研究所,215007

出　　处：《江苏医药》

基　　金：国家"973"基金(2001CB51003);江苏省高校自然科学研究计划(03KJB3201120);苏州大学医学发展基金(EE132031)

年　　份：2006

卷　　号：32

期　　号：6

起止页码：561-563

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、JST、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的克隆人PD-1基因,构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体,并转染入L929细胞,获得稳定高表达PD-1分子的L929细胞。方法用PCR法从pGEX-5X-3-PD-1扩增出PD-1基因,通过双酶切(PstI BamHI)装入逆转录病毒载体pGEZ Term中,脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染L929细胞,72 h后,加入Zeocin进行筛选,挑选出能稳定表达PD-1分子的L929细胞株。结果成功克隆了人PD-1基因,构建了含PD-1基因的重组逆转录病毒载体,包装出具有感染能力的重组PD-1逆转录病毒,筛选出具有稳定表达人PD-1分子的L929基因转染细胞。经流式细胞仪检测:PD-1分子在L929基因转染细胞中具有高表达,达到97.6%。结论构建了含人PD-1基因重组逆转录病毒的载体,筛选出稳定表达人PD-1分子的L929细胞株。

关 键 词：PD-1基因  逆转录病毒

分 类 号：R329.28] R392.32[基础医学类]