文献类型：期刊文章

作　　者：王保宁[1,2] 杨晓芳[1] 施桥发[1] 李明远[1,3] 陈翠萍[4] 曹康[1] 李虹[1,3]

机构地区：[1]四川大学基础医学与法医学院微生物学教研室 [2]兰州生物制品研究所,甘肃兰州730046 [3]四川大学人类疾病生物治疗国家重点实验室,四川成都610041 [4]中国药品生物制品检定所

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：国家科技部重点项目人类疾病动物模型及防治策略专项资助(No.96-A23-06-02)

年　　份：2006

卷　　号：22

期　　号：3

起止页码：276-279

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建霍乱毒素B亚单位(CtB)和幽门螺杆菌尿素膜通道蛋白(UreI)融合的原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,并初步研究融合蛋白CtB/UreI的表达特性和免疫特性。方法PCR从pUC18ctB中克隆ctB基因,定向在pET32a(+)/ureI的ureI基因5′端插入ctB基因,构建ctB和ureI双基因原核表达质粒pET32a(+)ctB/ureI,转该质粒于E.coliBL-21(DE3),经酶切和序列分析鉴定工程菌。IPTG诱导表达,HP-His亲和层析纯化,SDS-PAGE和Gel-ProAnalizer4分析,重组蛋白免疫BALB/c小鼠。用Westernblot和ELISA分析重组蛋白的免疫特性。结果工程菌含完整的ctB和ureI基因,与相对应基因的序列同源性分别为100%。在22℃,1mmol/LIPTG诱导4h后,重组蛋白的表达占菌体总蛋白12%,亲和层析纯化后蛋白纯度为94.3%。Westernblot表明重组蛋白分别能与相应的抗体反应,该蛋白免疫小鼠后能产生相应的IgG抗体。结论成功构建了能表达CtB/UreI蛋白的大肠杆菌表达菌株。对融合蛋白表达和纯化后,初步证明了该重组蛋白有CtB和UreI的双特异反应原性和免疫原性,为研究新型幽门螺杆菌疫苗奠定了坚实的基础。

关 键 词：幽门螺杆菌 霍乱毒素B亚单位 尿素膜通道蛋白  融合表达  免疫特性

分 类 号：R373]