文献类型：期刊文章

作　　者：马颖[1] 毛旭虎[1] 李海霞[1] 邹全明[1]

机构地区：[1]第三军医大学临床微生物学及免疫学教研室重庆市生物制药技术工程研究中心,重庆400038

出　　处：《免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30500436);军队杰出人才基金资助项目(04J009)

年　　份：2006

卷　　号：22

期　　号：3

起止页码：318-320

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建重组志贺样毒素亚Ⅱ结合亚单位(Stx2B)单链抗体基因,并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法借助连接肽(Gly4Ser)3将已成功扩增的抗Stx2B单抗1A5轻、重链可变区基因(VL、VH)连接成单链抗体(ScFv)基因VH-Linker-VL,并在VH5′端和VL3′端引入SfiⅠ和NotⅠ酶切位点,克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His之中,转化EcoliHB2151,IPTG诱导表达。亲和层析纯化抗体蛋白后,以SDS-PAGE、ELISA等方法分析鉴定表达产物。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析,证实基因构建正确。SDS-PAGE、ELISA分析表明ScFv基因在大肠杆菌中成功表达,表达产物的相对分子质量(Mr)为27 000,与理论预期值相符,且可与相应抗原特异结合。结论成功实现了抗Stx2B单链抗体的原核分泌表达,为探讨O157菌的感染机制及防治研究奠定了基础。

关 键 词：志贺样毒素 单链抗体 分泌表达

分 类 号：Q78]