文献类型：期刊文章

作　　者：王学军[1] 顾凯[1] 曹荣月[1] 林洁[1] 吴洁[1] 刘景晶[1]

机构地区：[1]中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室,南京210009

出　　处：《中国药科大学学报》

基　　金：theNationalHighTechnologyResearch&DevelopmentProgramofChina(863Program)(No.2005AA217032);NationalNaturalScienceFoundationofChina(No.39870175)andNaturalSci-enceFoundationofJiangsuProvince(No.BG2001011)

年　　份：2006

卷　　号：37

期　　号：2

起止页码：174-180

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、IPA、JST、RSC、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:构建一种新型表达载体(pEDCC),表达并纯化得到人源胰岛素原C肽。方法:将编码截短的门冬酰胺酶突变体(ansB-C),天然C肽,人IgG1铰链区(hinge),额外的酸敏感二肽(DP)以及富含碱性氨基酸的8肽(KRKRKKSR)的核苷酸序列依次分别插入pET28a载体中,构建表达载体pEDCC。在乳糖的诱导下,融合蛋白ansB-C-hinge-DPKRKRKKSRNGS-GR-C-peptide以包涵体形式高效表达。融合蛋白经洗涤和乙醇分级沉淀纯化后,通过酸水解将PKRKRKKSRNGSGR-C-peptide释放出来。C肽N端14肽用胰蛋白酶切割,通过DE52柱与C-peptide分离。结果:构建的表达载体pEDCC序列正确,融合蛋白经分离纯化得到了高纯度的重组人源胰岛素原C肽。结论:以截短的门冬酰胺酶作为融合伙伴,并以富含碱性氨基酸的8肽调节等电点是一种生产重组人源胰岛素原C肽的有效方法。

关 键 词：重组人源胰岛素原C肽  基因融合 表达与纯化  门冬酰胺酶 胰蛋白酶

分 类 号：R91[药学类]