文献类型：期刊文章

作　　者：韩春来[1] 吴志光[1] 史喜菊[2] 张灿[3] 柏亚铎[2] 汪明[1]

机构地区：[1]中国农业大学动物医学院 [2]北京市出入境检验检疫局,北京100026 [3]莱阳农学院动物科技学院,山东青岛266109

出　　处：《中国兽医科学》

年　　份：2006

卷　　号：36

期　　号：4

起止页码：311-314

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、WOS、ZGKJHX、ZR、核心刊

摘　　要：为了确定惠阳胡须鸡IFN-γ基因(chIFN-γ2)在毕赤酵母中表达的重组蛋白的抗病毒活性和蛋白的二级结构,将pGEM-T-chIFN-γ2重组质粒中的chIFN-γ2基因克隆到表达质粒pPICZαB上,经酶切鉴定、PCR鉴定和测序后的序列同源性分析,证明目的基因没有发生缺失、突变,并且插入方向正确。将重组质粒电转化到毕赤酵母感受态细胞GS115中,阳性转化子经甲醇诱导表达,获得了高效分泌表达。重组IFN-γ的分子质量约为33 ku,表达量达0.604 mg/mL,在鸡胚成纤维细胞(CEF)上抑制VSV的抗病毒活性为3.2×104U/mg。圆二色性分析表明,IFN-γ酵母重组蛋白属于典型的α螺旋蛋白,二级结构含量为:α螺旋55.1%,β折叠8.3%,转角13.9%,无规卷曲22.8%。采用毕赤酵母分泌表达了有活性的鸡IFN-γ,并首次证明鸡IFN-γ重组蛋白属于典型的α型蛋白。

关 键 词：惠阳胡须鸡  Ⅱ型干扰素  毕赤酵母 表达  抗病毒活性

分 类 号：S858.31]