文献类型：期刊文章

作　　者：吴蔼民[1] 刘进元[1]

机构地区：[1]清华大学生物科学与技术系分子生物学实验室,北京100084

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》

基　　金：国家科技部973项目(No.2004CB117303);863计划项目(No.2004AA222100;2002AA212051和2002AA207006)资助~~

年　　份：2006

卷　　号：22

期　　号：3

起止页码：243-246

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、PUBMED、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：利用染色体步行法,从已知DNA序列克隆侧翼未知序列是非常有效的方法之一,但由于所选用的特定限制性内切酶对目标基因组不能酶解成合适大小的片段,因而受PCR扩增能力的局限,往往扩增不出有效产物.针对这一点,这里我们介绍一种简单有效的改良方法,它包括以下步骤:首先用不同的限制性内切酶(包括平末端和粘性末端)酶解目标基因组DNA,接着,选择能将基因组酶切成弥散、分布均匀的限制性内切酶,如DraⅠ和HindⅢ,合成相对应的接头;然后,选择弥散的、分布均匀的限制性内切酶的酶解产物,构建成含相应接头的基因组DNA文库,用作PCR的模板;最后,用接头引物和特异引物,通过巢式PCR扩增目的片段,获得了理想的扩增效果.采用改进后的染色体步查法,有效地从较复杂的棉花核DNA中克隆出6个棉花启动子序列.

关 键 词：连接介导的步查法  限制性内切酶 棉花 启动子序列 方法改良  

分 类 号：Q7]