文献类型：期刊文章

作　　者：何峰容[1] 王晓娟[2] 周小欧[3] 李曼君[3] 朱慧芬[3] 吴万敏[2] 沈关心[3]

机构地区：[1]湖北省新华医院检验科,武汉430015 [2]内蒙古医学院第一附属院普通外科,呼和浩特010050 [3]华中科技大学同济医学院基础医学院免疫学系,武汉430030

出　　处：《免疫学杂志》

基　　金：内蒙古自治区卫生厅资助项目(20035028);武汉市科委基金(20036101002-01)

年　　份：2006

卷　　号：22

期　　号：2

起止页码：224-226

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的从人源噬菌体抗体库中筛选抗SARS独特型抗体为SARS的诊断及疫苗的研究奠定基础。方法以混合SARS病人恢复期血清免疫球蛋白(Ig)作为筛选分子,从噬菌体抗体库中筛选出能与病人血清IgG(IgM)结合的抗体,并通过与混合正常人血清Ig作负性筛选,从而获得抗SARS病毒的独特型抗体(AId)。通过4轮“吸附-洗涤-扩增”,从最后一轮所得单克隆菌株中分别通过ELISA筛选出能和SARS病人恢复期血清Ig结合的菌株,提取质粒DNA,并对PCR扩增产物进行DNA序列测定,最后用所筛选的克隆通过与不同人群血清反应,证实其特异性。结果随机挑选经第4轮筛选后的200个单克隆菌落,其中有10个与SARS病人恢复期血清Ig结合的OD值明显高于其与正常人Ig结合的OD值;以上10个克隆经PCR扩增,其中有6个克隆于1 000 bp处有电泳条带;其DNA序列经与BLAST数据库和IMGT/QUEST软件比对有5个均与人的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)高度同源,且与其同源性最高的人Ig的VH属VHI亚群,VL属k链,属VKⅡ亚群;最后确认有3个克隆其噬菌体抗体和SARS病人血清Ig结合的OD值均明显高于与正常人血清Ig结合的OD值。结论利用抗体库技术可不经免疫制备特异性抗SARS抗体独特型抗体,为SARS诊断及疫苗的研制奠定基础。

关 键 词：SARS  噬菌体抗体库技术 独特型抗体(AId)  单链抗体(ScFv)  

分 类 号：R392]