文献类型：期刊文章

作　　者：朱健琦[1] 刘志刚[1] 高波[1] 吉坤美[2] 邢苗[1]

机构地区：[1]深圳大学生命科学学院,广东深圳518060 [2]深圳市微生物基因工程重点实验室,广东深圳518060

出　　处：《免疫学杂志》

基　　金：国家863计划(2002AA214011);国家自然科学基金(30471505;30271226);广东省科技重大专项(2003A3080502);深圳市科技计划项目(200218)资助

年　　份：2006

卷　　号：22

期　　号：2

起止页码：213-216

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的获得大量具有良好的IgE结合活性的Der fⅡ重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究。方法挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,采用RT-PCR的方法扩增Der fⅡ片段,产物连接进入T载体(pMD18)。经扩增后,用NdeⅠ和XhoⅠ双酶切后将目的片段连接到pET-24a表达载体上,得到重组质粒pET-Der f2,工程菌经IPTG诱导培养,明显表达出Der fⅡ蛋白,表达产物经固定化金属配体亲和层析纯化,用Western blot检测免疫学活性。结果成功提取粉尘螨的总RNA,扩增出编码129个氨基酸的长度为387个碱基对的核苷酸片段。序列分析结果和Genebank上的基因序列(D10448)同源性98%,其中有6个碱基不同。使用高效表达的原核载体pET,所得产物的5′端含有抗原性极小的6个组氨酸标签。表达质粒在E.coliBL21 star中得到高效表达,表达产物主要以包涵体形式存在,目的蛋白具有良好的变应原性。结论成功构建了粉尘螨Ⅱ类变应原的原核表达载体,并纯化了具有免疫特性的重组蛋白,为进一步开展Der fⅡ蛋白和重组疫苗研究奠定了基础。

关 键 词：粉尘螨 变应原 表达  纯化

分 类 号：R392]