文献类型：期刊文章

作　　者：刘宏磊[1] 李希[1] 宋后燕[1] 汤其群[1]

机构地区：[1]复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学系-分子医学教育部重点实验室,上海200032

出　　处：《复旦学报（医学版）》

基　　金：863项目(2004AA215131);上海市重点科技攻关项目(044319203);上海市重点实验室合作开放资金(04d205607)资助

年　　份：2006

卷　　号：33

期　　号：1

起止页码：97-100

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的表达和纯化人脂联素(adiponectin,APN)球状结构域并观察其生物学活性。方法用PCR方法复制人脂联素球状结构域(globular domain of adiponectin,gAPN)的cDNA,并克隆于pET28a(+)原核表达载体中。将重组表达质粒pET28a(+)-gAPN转化大肠埃希菌BL21(DE3),37℃培养至A600达到0.6时,加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达。细菌经超声破菌,得到粗提的包涵体洗涤变性后经镍柱亲和层析柱一步纯化,获得纯化的gAPN重组蛋白,复性后冻干保存。然后,用链佐星(streptozocin,STZ)诱导的小鼠高血糖模型检测其生物活性。结果IPTG诱导后有Mr约为17 000大小的目的蛋白表达,免疫印迹结果进一步表明,其具有人gAPN的抗原性。表达蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体蛋白的30%以上,表达产物经变性、纯化、复性,可获得纯度90%以上的目的蛋白。该重组蛋白能够降低STZ诱导的小鼠高血糖模型的血糖水平。结论在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达了人gAPN蛋白,经变性、纯化、复性后得到具有生物学活性的蛋白。

关 键 词：脂联素 重组蛋白 表达与纯化  高血糖模型

分 类 号：Q57] Q78