文献类型：期刊文章

作　　者：胡大林[1] 庄志雄[2] 何云[1] 纪卫东[1] 唐冬生[3] 袁建辉[2] 方道奎[1] 沙焱[1] 杨建平[1] 涂晓志[1] 胡恭华[1]

机构地区：[1]中山大学公共卫生学院,广州510080 [2]深圳市疾病预防控制中心 [3]佛山大学医学院

出　　处：《卫生研究》

基　　金："973"国家重点基础研究发展计划基金资助项目(No.2002CB512904);国家自然科学基金资助项目(No.39970636)

年　　份：2006

卷　　号：35

期　　号：1

起止页码：4-7

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、PUBMED、RCCSE、RSC、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的克隆用于人DNA聚合酶β(DNApolymerasebeta,Polβ)基因靶向RNA干扰的双链RNA(doublestrandRNA,dsRNA)寡核苷酸绿色荧光蛋白C1载体重组子“pEGFPC1pU6dsRNA”,为进一步研究人Polβ基因在环境化学污染物所致的DNA损伤修复中的作用机制作准备。方法依据Genbank中人polβ基因的cDNA序列,运用dsRNAoligonucleotidedesigner设计出用于RNA干扰用的dsRNA寡核苷酸序列,并以化学方法合成之。通过重组DNA技术将合成好的dsRNA克隆到含人pU6启动子的pSIRENRetroQ逆转录病毒载体上,以此重组子转化感受态E.coliDH5α,经氨卞青霉素筛选后进行扩增,并抽提质粒。运用EcoRⅠ和BglⅡ消化并回收“pU6dsRNA”目的片段,再将“pU6dsRNA”亚克隆到pEGFPC1上,获“pEGFPC1pU6dsRNA”重组子,并进行酶切鉴定和序列分析。结果经酶切鉴定发现,“pEGFPC1pU6dsRNA”载体重组子处于预期条带位置,序列分析显示与所设计的目的片段序列完全相符。结论作者克隆了用于人Polβ基因靶向RNA干扰的dsRNA绿色荧光蛋白C1载体重组子“pEGFPC1pU6dsRNA”,为进一步研究Polβ基因功能作好了准备。

关 键 词：DNA聚合酶Β RNA干扰 DSRNA 重组子 基因克隆  

分 类 号：R994.6] Q785[药学类]