文献类型：期刊文章

作　　者：熊盛[1] 钱垂文[1] 王一飞[2] 黄立[2] 李久香[2] 严玖凤[3] 王小宁[3] 张晓伟[3] 毕志刚[3]

机构地区：[1]暨南大学药学院制药工程教研室 [2]暨南大学生物医药研究开发基地,广州510630 [3]北京凯正生物工程发展有限责任公司,北京100850

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》

基　　金：国家自然科学基金(No.30371661;No.30400071);广东省自然科学基金团队项目(No.039213)经费资助.~~

年　　份：2005

卷　　号：21

期　　号：6

起止页码：815-821

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、PUBMED、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：对核苷二磷酸激酶A(NDPKA)的异构及其分子机制进行研究.还原和非还原SDSPAGE观察重组人核苷二磷酸激酶A(rhNDPKA)的异构;RPHPLC分析rhNDPKA异构体的反相色谱行为,并测定rhNDPKA异构体的酶活性;多角度激光散射法测定rhNDPKA异构体在溶液中的表观分子量;飞行质谱分析异构体的质量肽谱.结果发现,rhNDPKA在非还原SDSPAGE上表现为4条带,对应于NDPKA的氧化型、还原型、氧化型二聚体和还原型二聚体,其分子量分别为18.1kD、21.3kD、35.2kD和38.3kD.RPHPLC发现,还原型rhNDPKA和氧化型rhNDPKA疏水性有差异.新鲜制备的rhNDPKA在纯水溶液中,经空气氧化后,逐渐由还原型向氧化型过渡,而还原剂或生理盐水可使rhNDPKA稳定于还原型或氧化型.酶活测定结果表明,还原型rhNDPKA比活性为1965±166Umg,氧化型rhNDPKA比活性为974±53Umg.多角度激光散射检测发现,还原型rhNDPKA在溶液中仍可形成六聚体.质量肽谱结果证明,在氧化型rhNDPKA中,C4和C145位巯基形成二硫键,而C109位巯基游离存在.根据本文所确定的NDPKA单体中的二硫键位置,推导出rhNDPKA单体异构体和二聚体异构体的变构原理,这为进一步研究NDPKA的多能性调节机制打下了良好基础.

关 键 词：核苷二磷酸激酶A  异构 多角度激光散射  飞行质谱  二硫键 分子机制

分 类 号：Q71] Q558