文献类型：期刊文章

作　　者：钱建民[1] 芮晓晖[1] 史留斌[1] 王乾伟[1] 李国祥[2]

机构地区：[1]复旦大学附属华山医院器官移植科,上海200040 [2]南京医科大学第一附属医院

出　　处：《中华实验外科杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(C03020504)

年　　份：2005

卷　　号：22

期　　号：12

起止页码：1559-1561

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建猪MHCⅡ分子的反转录病毒表达载体,建立产生病毒颗粒的包装细胞株,体外转导小型猪骨髓细胞并观察目的基因的表达情况,为研究小型猪转导同种异体MHCⅡ分子对于肝脏移植特异性免疫耐受的诱导提供实验基础和实验材料。方法利用基因重组技术将目的基因SLA-DRBdd、SLA—DQAdd和SLA-DQBdd克隆到反转录病毒载体pLNCX2上,通过脂质体转染包装细胞AmphoPackTM-293细胞,从G418筛选阳性克隆细胞培养上清中获得了有感染性的病毒颗粒;并对体外培养的猪骨髓细胞进行了感染,采用Nothern杂交和逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)等方法检测了目的基因在骨髓细胞中的表达。结果经过酶切和测序验证已成功构建了 MHCⅡ分子的反转录病毒表达载体,在转染AmphoPackTM-293细胞后可以产生有感染性的重组病毒颗粒,稳定的CFM-GFG418抗性率为6％～11％,RT结果显示抗性细胞中有目的基因的RNA 转录产物存在,而转染空载体的对照组没有。结论重组有目的基因的逆转录病毒载体pLNCX2 经过包装细胞AmphoPackTM-293产生的病毒颗粒可以有效地将猪MHCⅡ分子转导入猪的骨髓细胞并获得长期稳定的表达。

关 键 词：MHCⅡ  免疫耐受  骨髓细胞  逆转录病毒载体 猪  基因表达  

分 类 号：R346[基础医学类] R657.3