文献类型：期刊文章

作　　者：李永哲 [1] 刘镭 [2] 孙庆国 [3] 曾常茜 [4] 赵振国 [1] 佟大伟 [1] 张蜀澜 [5] 高扬 [6] 于孟学 [5] 朱立平 [1]

机构地区：[1]100730,中国医学科学院中国协和医科大学,北京协和医院检验科 [2]北华大学医学院免疫学教研室 [3]北华大学医学院免疫学教研室,吉林北方肝胆医院 [4]吉林北方肝胆医院 [5]中国医学科学院中国协和医大学基础医学研究所免疫学系 [6]100730,中国医学科学院中国协和医科大学,北京协和医院风湿免疫科

出　　处：《中华检验医学杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30471617);国家863高技术研究发展计划资助项目(20024032)

年　　份：2005

卷　　号：28

期　　号：11

起止页码：1120-1125

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的克隆人核包膜蛋白自身抗原gp210、p62和LBR基因,构建重组表达质粒,获得具免疫学活性的纯化重组蛋白,建立酶联免疫吸附法(ELISA),初探抗核包膜蛋白gp210、p62和LBR自身抗体在原发性胆汁性肝硬化(PBC)诊断中的意义。方法构建重组表达载体,在大肠杆菌BL21、M15中表达;融合蛋白经NiNAT树脂柱进行亲和层析纯化,并通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)及免疫印迹法(WB)进行免疫活性鉴定;应用表达蛋白建立间接ELISA,检测60名健康体检者、68例原发性胆汁性肝硬化(PBC)、60例病毒性肝炎、60例结缔组织病患者血清中抗gp210、p62和LBR抗体。结果经重组质粒测序和酶切结果证实,gp210、p62和LBR目的基因已正确插入原核表达载体中,基因序列正确,符合表达框架;SDSPAGE检测表达产物分别在69000、62000和27000处有一明显的蛋白表达条带,WB分析表明重组蛋白具有人gp210、p62和LBR抗原反应性。ELISA检测标本血清结果显示,PBC中,抗gp210抗体、抗p62抗体和抗LBR抗体阳性率分别为36.8%、30.9%和5.9%;而病毒性肝炎组、结缔组织病组和健康体检组中,除抗gp210抗体在结缔组织病患者中阳性率为1.7%外,3种自身抗体检测结果均为阴性。PBC组3种自身抗体阳性率与疾病对照组及正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05和P<0.01)。结论本研究成功克隆人核包膜蛋白自身抗原gp210、p62和LBR基因,并将其在大肠杆菌中成功表达。应用纯化融合蛋白建立的ELISA检测抗gp210抗体、抗p62抗体和抗LBR抗体,对PBC具有较好特异性,为PBC的特异性临床诊断提供了有效的工具。

关 键 词：肝硬化,胆汁性  自身抗原 核包膜蛋白  

分 类 号：R575.2] R973.2]