文献类型：期刊文章

作　　者：井申荣[1] 邹全明[1] 曾韦锟[1] 毛旭虎[1] 刘开云[1]

机构地区：[1]第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室

出　　处：《中华微生物学和免疫学杂志》

年　　份：2005

卷　　号：25

期　　号：9

起止页码：773-776

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组到表达质粒pPIC9K的BamHⅠ和EcoRⅠ之间,SalⅠ酶切线性化重组质粒IL-10/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因IL-10,甲醇诱导rhIL-10的表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定及MC/9细胞分析IL-10生物学活性。结果成功构建了重组表达质粒IL-10/pPIC9K,获得了4个含IL-10基因的高拷贝毕赤酵母转化子,甲醇诱导后,在摇瓶水平的IL-10表达量为(0.627±0.09)mg/L,比活性为1.5×105U/mg。结论毕赤酵母分泌表达的IL-10具有良好的生物学活性。

关 键 词：白细胞介素10 毕赤酵母 分泌表达  生物学活性  重组人白细胞介素10 生物学活性测定  毕赤酵母 IL-10基因 质粒pPIC9K  SDS-PAGE RHIL-10 Western  EcoRⅠ  

分 类 号：R392]