文献类型：期刊文章

作　　者：张驰宇[1] 徐顺高[1] 黄新祥[1]

机构地区：[1]江苏大学医学技术学院,镇江212001

出　　处：《生物化学与生物物理进展》

基　　金：江苏省高校自然科学指导性计划资助项目(04KJD180044);江苏大学高级人才科研启动基金资助项目(2281270002).~~

年　　份：2005

卷　　号：32

期　　号：9

起止页码：883-888

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、SCI(收录号：WOS:000232115500013)、SCI-EXPANDED(收录号：WOS:000232115500013)、SCIE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：为建立一种新颖、简便的荧光实时RT-PCR相对定量方法,根据实时定量标准曲线,推导出相对定量基因表达的公式.公式显示相对表达指数只与CT值和标准曲线的斜率相关.构建标准曲线的标准品需要通过克隆和体外转录获得,实验过程繁琐.当人为成比例增减标准品各个稀释度的具体拷贝数时,标准曲线的斜率并不改变,说明标准曲线斜率与标准品的具体拷贝数无关.因此,新的相对定量方法可以用任何一个待测样品的总RNA(或cDNA),经系列稀释后作为标准品,来构建相对定量标准曲线,获得斜率.与绝对定量法比较,新方法获得了基本相同的斜率和非常一致的定量结果(差异小于4%),而传统的2-#$CT法却表现出较大的定量误差.这些结果表明,新的相对定量方法是一种简便、准确和高效的定量基因表达的方法.

关 键 词：荧光实时定量RT-PCR  相对定量  绝对定量  标准曲线  mRNA定量  斜率  

分 类 号：Q781]