文献类型：期刊文章

作　　者：孙保存[1] 臧凤琳[1] 牛瑞芳[1] 魏熙胤[1] 赵秀兰[2] 张诗武[1]

机构地区：[1]天津医科大学肿瘤研究所,天津市300060 [2]天津医科大学病理教研室,天津市300070

出　　处：《世界华人消化杂志》

基　　金：天津市自然科学基金资助项目;No.013611511~~

年　　份：2005

卷　　号：13

期　　号：13

起止页码：1519-1523

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、EMBASE、SCOPUS、核心刊

摘　　要：目的:研究对应FLIP基因的siRNA片段对大肠癌细胞株HT-29凋亡的影响,明确FLIP在Fas介导的凋亡途径中的作用. 方法:体外培养大肠癌细胞HT-29,通过电穿孔技术将特异性siRNA片段转染入细胞,半定量RT-PCR 法判断干扰前后FLIP mRNA水平的变化,分析RNA 干扰的特异性、时效性,并比较对应不同位点的两个siRNA片段对FLIP的干扰效果.经凋亡诱导型抗体激活后,以Annexin V染色法及DNA降解片段检测分析干扰前后HT-29细胞对Fas介导的凋亡敏感性的改变. 结果:特异性siRNA片段能有效降低FLIP mRNA水平,最大干扰效率达65.02%,明显高于作为对照的非相关片段;干扰作用于转染后24 h即可出现,48 h达高峰,72 h稍有降低;对应不同位点的两个siRNA片段对FLIP均可产生干扰作用,彼此间差别不大.在诱导型抗体的刺激下,与未转染细胞相比,转染siRNA 的HT-29细胞中凋亡细胞所占比例明显增加. 结论:特异性siRNA片段可显著降低FLIP基因mRNA 的表达水平,并提高HT-29细胞对Fas介导的凋亡敏感性.以FLIP为靶点的RNA干扰技术可望成为大肠癌基因治疗的新方法.

关 键 词：FLIP 干扰性小RNA  大肠癌细胞株HT-29  HT-29细胞 半定量RT-PCR法  RNA片段  mRNA水平  FAS介导 Annexin  DNA降解片段  RNA干扰技术  凋亡敏感性 基因mRNA  干扰作用  电穿孔技术 siRNA  癌基因治疗 特异性  体外培养  凋亡途径  抗体激活  

分 类 号：R735.34]