文献类型：期刊文章

作　　者：黄飚[1,2] 陶文沂[1] 张莲芬[1] 时瑾[1] 杨海麟[1] 金坚[1]

机构地区：[1]江南大学生物工程学院生物制药系,工业生物技术教育部重点实验室 [2]江苏省原子医学研究所,无锡214063

出　　处：《生物化学与生物物理进展》

基　　金：国家"十五"科技公关项目(2004BA501A16);江苏省无锡市社会发展项目(SC030006)~~

年　　份：2005

卷　　号：32

期　　号：7

起止页码：662-666

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、SCI(收录号：WOS:000230606800014)、SCI-EXPANDED(收录号：WOS:000230606800014)、SCIE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：采用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术建立快速的高灵敏度的赭曲霉毒素A(OTA)全自动检测方法.将OTA-BSA作为免疫分子免疫Balb/c小鼠,OTA-KLH为筛选用抗原包被板,用间接酶联免疫分析(ELISA)法筛选出专一针对OTA的高效价的阳性克隆3G9,用杂交瘤细胞制备抗OTA单克隆抗体.用OTA-BSA包被96孔板为固相抗原,与游离OTA共同竞争有限的抗OTA单克隆抗体,以稀土离子Eu3+标记的羊抗鼠抗体进行示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立OTA-TRFIA.该方法的灵敏度为0.03μg/L,测量范围为0.03￣1000μg/L,批内和批间变异分别为3.7%和5.3%,平均回收率为94.2%,与赭曲霉毒素B的平均交叉反应为3.7%,与黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白和苯基丙氨酸无交叉反应,说明抗体的特异性很好.8条不同时间进行的间接竞争OTA-TRFIA的效应点均值ED80、ED50、ED20分别为(0.33±0.02)μg/L、(1.44±0.08)μg/L和(5.22±0.12)μg/L,说明方法的稳定性好,样品经TRFIA和ELISA试剂盒同时检测OTA,两者的相关系数为0.925,结果相符.研究表明,OTA-TRFIA是目前报道的OTA检测中最灵敏的方法,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景.

关 键 词：赭曲霉毒素A(OTA)  时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)  真菌毒素 单克隆抗体

分 类 号：R155.31]