文献类型：期刊文章

作　　者：刘如石[1] 邱义兰[1] 杨坤宇[2] 张智洪[2] 梁良[2] 张军[2] 夏宁邵[2]

机构地区：[1]湖南师范大学生命科学学院生物化学与分子生物学系,长沙410081 [2]福建省医学分子病毒学研究中心,厦门361005

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：福建省重大科技项目(No.2002F103);教育部跨世纪人才培养计划~~

年　　份：2005

卷　　号：21

期　　号：4

起止页码：540-546

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：用PCR扩增SARS冠状病毒N蛋白全长cDNA,克隆到酵母表达载体pPIC3·5K,构建pPIC3·5K_SCoVN酵母表达质粒。表达质粒线性化后电转化到毕赤酵母GS115中,经G418_RDB,MM/MD平板与PCR扩增筛选获得His+Mut+重组菌株。比较研究了不同的培养基、溶解氧以及甲醇浓度对菌株生长与重组蛋白表达的影响。结果表明:FBS培养基最适宜重组菌的生长与表达,溶氧对菌体的生长与表达有显著的影响,甲醇诱导最佳终浓度为1%(V/V),SDS_PAGE分析重组蛋白的表达量,发现重组N蛋白表达量占细胞总蛋白的6%,每升培养基可以生产410mg重组N蛋白,生物量达45OD600。Westernblotting结果表明,重组N蛋白对鼠源单克隆抗体以及SARS病人恢复期血清具有较强的特异性反应。对摇瓶培养条件进行了发酵罐放大实验,结果生物量达到348OD600,表达量达到2·5g/L,分别为摇瓶表达的7·7倍和6·1倍,为SARS早期血清学诊断研究以及为N蛋白在病毒复制以及致病机理的研究奠定了一定的基础。

关 键 词：严重急性呼吸综合症 核衣壳蛋白 毕赤酵母 真核表达

分 类 号：R373]