文献类型：期刊文章

作　　者：谭秀华[1] 武玉永[2] 马立新[1] 蒋思婧[1]

机构地区：[1]湖北大学生命科学学院分子微生物与基因工程实验室,武汉430062 [2]滨州医学院细胞生物学教研室,滨州256603

出　　处：《微生物学报》

基　　金：国家"863计划"(2002AA2270117);国家"十五"科技攻关(2004BA713B04-05);湖北省自然科学基金(2003ABA118)~~

年　　份：2005

卷　　号：45

期　　号：4

起止页码：543-546

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、PUBMED、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：通过功能平板从土壤中筛选得到含甘露聚糖酶基因的耐碱菌株。构建其基因组文库,从中筛选到甘露聚糖酶基因TM1并测序分析,用BLAST分析表明,TM1的氨基酸序列与其他在GenBank发表的甘露聚糖酶的氨基酸序列的同源性均低于60%,故确定其为一个新的甘露聚糖酶基因(GenBank登录号为AY623903)。将此基因去除信号肽后的编码序列克隆到表达载体pHBM905C上,得到重组质粒pHBM1201。经SalⅠ酶切后分别转化毕赤酵母(Pichiapastoris)KM71、GS115、SMD1168,得到分泌表达的重组毕赤酵母。挑选相对表达量最高的重组毕赤酵母SMD1168-3在摇瓶中诱导产酶,对该酶的粗酶进行酶学性质分析表明,其最适反应温度为55℃,最适PH值为7.5,以魔芋粉为底物所测得的最高酶活为41.8U,半衰期为1h,在80℃保温5min其酶活由最初酶活的77%下降到11%,温度下降到55℃后活性可恢复到最初酶活的60%以上。

关 键 词：甘露聚糖酶,克隆,毕赤酵母,表达,酶活  

分 类 号：Q78]