文献类型：期刊文章

作　　者：林育泉[1] 周鹏[1] 曾召绵[2]

机构地区：[1]中国热带农业科学院热带生物技术研究所热带作物生物技术国家重点实验室,海口571101 [2]海南国栋药物研究所有限公司,海口570216

出　　处：《中国生物工程杂志》

年　　份：2005

卷　　号：25

期　　号：5

起止页码：60-66

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：通过PCR技术,从苦瓜总DNA中扩增出编码MAP30成熟蛋白的基因,经测序鉴定后亚克隆到原核表达载体pET 30a中,构建成带有N端6His tag的融合表达载体。表达载体用CaCl2 介导的化学转化法转化E .coliBL2 1 (DE3) ,然后利用PCR筛选阳性克隆。工程菌经1mmol/LIPTG诱导4h实现高效表达,而且在30℃时融合蛋白表达量最高,约占菌体总蛋白5 6%。可溶性分析表明,该融合蛋白在大肠杆菌中主要以可溶的形式存在。重组蛋白通过Ni2 +鏊合亲和层析进行纯化,纯化蛋白占上清总蛋白37. 2 % ,发酵液产率为2 5 0mg/L。Westernblot分析表明,重组蛋白可与兔抗his tag多克隆抗体发生特异性反应。利用MTT法分析重组MAP30的细胞毒性,结果表明其对小鼠3T3和S 1 80肿瘤细胞株具有明显的抑制作用,ID50 分别约为5 0 μg/ml和3 0mg/ml,而对人正常胚肺二倍体WI 38细胞株的毒性极小。

关 键 词：苦瓜 MAP30蛋白  基因克隆 基因表达  抗肿瘤活性 基因工程药物

分 类 号：S642.5] R979.1]