文献类型：期刊文章

作　　者：赵爱志[1,2] 彭建强[3] 曹晖[3] 康禹[3] 崔莲仙[1] 吴小兵[3,4] 何维[1]

机构地区：[1]中国医学科学院协和医科大学基础医学研究所免疫室 [2]本元正阳基因技术股份有限公司,北京100176 [3]本元正阳基因技术股份有限公司 [4]中国疾病控制中心病毒病预防控制所,北京100052

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.C0302050102)

年　　份：2005

卷　　号：21

期　　号：4

起止页码：449-451

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:利用细胞内重组的方法,构建大库容量的人源性抗SARS病毒单链抗体(scFv)库,为筛选SARS病毒抗原的人源性抗体奠定基础。方法:取6例SARS康复患者的80mL外周血,分离淋巴细胞后提取总RNA。分离纯化mRNA并反转录成cDNA后,扩增抗体重链、轻链可变区基因片段。然后经重叠延伸PCR装配成scFv基因并克隆入噬粒载体pDAN5中,电转化大肠杆菌TG1构建初级抗体库。制备初级库噬菌体后,感染大肠杆菌BS1365进行细胞内重组制备次级抗体库。结果:初级库库容量为3×109,在大肠杆菌BS1365中重组后得到3×1011的次级抗体库。结论:细胞内重组方法的应用可使大库容量抗体库的构建变得简单易行。构建的抗SARS病毒单链抗体次库不仅接近人类天然抗体库的水平,而且多样性好,为筛选抗SARS病毒抗原的抗体提供了保证。

关 键 词：冠状病毒 单链抗体库 细胞内重组  

分 类 号：R392.11]