文献类型：期刊文章

作　　者：张巧[1] 赵国强[2] 刘红梅[3] 宫亚欧[3] 丁兰萍[3] 薛乐勋[4] 杨胜利[3]

机构地区：[1]郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室,郑州450052 [2]郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室,郑州450052 [3]郑州大学基础医学院食管癌研究室,郑州450052 [4]郑州大学细胞生物学研究室,郑州450052

出　　处：《郑州大学学报（医学版）》

基　　金：教育部"十五"211工程重点学科建设项目(教重办2002第2号)

年　　份：2005

卷　　号：40

期　　号：3

起止页码：411-413

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、CAS、CSA、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：中图分类号Q782摘要目的:构建人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT,并观察融合蛋白的表达。方法:用RTPCR方法从人肝癌组织中扩增出带有EcoRⅠ酶切位点的hTERT基因片段,与pGEMTEasy连接,转化感受态大肠杆菌JM109,经蓝白筛选、PCR扩增等筛选阳性菌落,用EcoRⅠ酶切获取目的片段,并与EcoRⅠ酶切过的pGEX4T-1质粒连接,重组子转化BL21感受态大肠杆菌,PCR扩增筛选出阳性菌落。基因测序并用Omega2.0软件比较分析重组质粒中hTERT基因片段与GenBank中的已知序列的同源性。通过诱导pGEX4T1融合蛋白表达,用抗hTERT多抗对融合蛋白进行Westernblot鉴定,薄层凝胶光密度扫描测定融合蛋白表达量。结果:PCR扩增等方法证实,人端粒酶逆转录酶原核表达载体pGEX-4T-1-hTERT构建成功,其中hTERT基因片段与GenBank中相应基因同源性为98.73%,氨基酸序列同源性为99.68%。Westernblot检出GST-hTERT融合蛋白,其表达量达28.4%。结论:成功构建了pGEX-4T-1-hTERT原核重组质粒并获得高度表达。

关 键 词：人端粒酶逆转录酶 原核表达载体 重组质粒

分 类 号：Q782]