文献类型：期刊文章

作　　者：周怀瑜[1] 何深一[1] 丛华[1] 古钦民[1] 李瑛[1] 赵群力[1] 杨婷婷[1] 张加勤[1]

机构地区：[1]山东大学医学院病原生物学研究所,山东济南250012

出　　处：《中国寄生虫病防治杂志》

基　　金：国家自然科学基金项目(No.30371257);留学归国人员基金项目(教外司留[2003]406号);山东省自然科学基金项目(No.Y99C02);山东省可持续发展十大科技示范工程项目(鲁政[1998]28号文件)。

年　　份：2005

卷　　号：18

期　　号：2

起止页码：88-91

语　　种：中文

收录情况：CSCD、CSCD_E2011_2012、普通刊

摘　　要：目的构建含有弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因的克隆载体及酵母表达载体,为进一步真核表达重组P30CTX蛋白奠定基础。方法PCR扩增P30CTX复合基因,产物回收后与pMD18T载体连接,转化大肠埃希菌DH5α,经氨苄抗性筛选及测序,建立克隆载体pMD18T P30CTX;克隆载体与表达载体双酶切后,回收1313bp的P30CTX基因,亚克隆入酵母表达载体,转化大肠埃希菌DH5α,筛选、测序后建立酵母表达载体PGAPZαA P30CTX。重组质粒分别以PCR、酶切及测序鉴定。使用生物信息软件分析P30CTX复合基因,预测编码蛋白结构。结果重组质粒经PCR可得1313bp的特异条带,EcoRⅠ、XbaⅠ双酶切获得1313bp和3085bp的条带,与预期大小一致,测序结果证实为pGAP P30CTX基因,序列分析同源性为99.82%,P30CTX蛋白结构折叠无明显改变。结论成功构建了含有弓形虫主要表面抗原P30与免疫佐剂CTA2/B复合基因的克隆载体及酵母表达载体,预测毕赤酵母表达系统对P30CTX的抗原性不会产生影响。

关 键 词：刚地弓形虫 P30 免疫佐剂CTA2/B  基因克隆  酵母表达载体 生物信息学  

分 类 号：R382.5]