文献类型：期刊文章

作　　者：吴德[1] 吴忠道[1] 胡旭初[1] 何东苟[1] 黄艳[1] 余新炳[1]

机构地区：[1]中山大学中山医学院病原生物学部,广东广州510089

出　　处：《中国寄生虫病防治杂志》

基　　金：广东省自然科学基金首批科研团队项目;广东省科技厅社会发展攻关计划(No. 2002B31005);广州市科技攻关计划(No.200223 E4022)。

年　　份：2005

卷　　号：18

期　　号：1

起止页码：28-32

语　　种：中文

收录情况：CSCD、CSCD_E2011_2012、普通刊

摘　　要：　目的　通过筛选华支睾吸虫成虫 cDNA质粒文库,寻找、识别新基因,并将其编码区克隆到原核表达质粒pGEX 4T 1中,表达出融合蛋白,为进一步研究其功能奠定基础。　方法　用文库通用引物对华支睾吸虫 cDNA 质粒文库进行PCR扩增,对产物为500 bp以上的质粒进行测序,测序结果在NCBI 和ExPasy 网站上进行序列分析,识别华支睾吸虫新基因,并应用ORFfind、ClustalW、NCBI Conserved Domain Search等程序对其进行开放阅读框、进化树及结构域分析。根据 pGEX 4T 1上的多克隆位点及所发现的新基因cDNA 编码序列设计引物,进行PCR 扩增,扩增产物回收纯化后克隆到原核表达载体 pGEX 4T 1 上。构建的重组表达质粒经 PCR、双酶切及测序鉴定,并对鉴定过的重组体进行诱导表达,表达产物经SDS PAGE电泳鉴定。　结果　发现CsGAPDH基因,完整阅读框含1 017 个碱基对,编码339 个氨基酸,理论分子质量单位为37.024 09 ku ,理论pI为6.66 。序列分析显示,CsGAPDH与曼氏血吸虫GAPDH的同源性为78%,具有GAPDH保守功能域。所构建的重组原核表达质粒经PCR、双酶切及测序鉴定与目标基因相符。SDS PAGE电泳显示表达产物在63 ku处有1条特异性条带。　结论　发现华支睾吸虫 GAPDH基因,成功构建重组原核表达质粒并表达出融合蛋白。

关 键 词：华支睾吸虫 磷酸甘油醛脱氢酶  克隆 原核表达 序列分析  

分 类 号：R383.22]