文献类型：期刊文章

作　　者：沈毅珺[1,2] 潘卫[1] 许燕[3] 王征[3] 杨彤[3] 谭靖伟[3] 吴劲松[3] 吴芳[3] 曹峰[3] 刘彦君[3]

机构地区：[1]第二军医大学基础医学部微生物学教研室 [2]上海复旦张江生物医药股份有限公司,上海201203 [3]上海复旦张江生物医药股份有限公司

出　　处：《生物化学与生物物理进展》

基　　金：国家高技术"863"研究发展计划资助项目(2001AA215051;2002AA2Z3309).~~

年　　份：2005

卷　　号：32

期　　号：1

起止页码：75-80

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、SCI(收录号：WOS:000226433200012)、SCI-EXPANDED(收录号：WOS:000226433200012)、SCIE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：淋巴毒素(lymphotoxin,LT) 通过TNFR1受体传递凋亡信号,从而发挥抗肿瘤活性. 对LT的受体结合区域进行多点随机突变,利用噬菌体展示重组人淋巴毒素(rhLT) R46,S106,L130三点随机突变组合文库和S106～F110区域随机突变体库. 噬菌体库与固相化TNFR1受体进行亲和筛选,富集了能与TNFR1受体结合的rhLT突变体. 随机挑选20个单克隆噬菌体进行ELISA受体结合鉴定,其中80%的克隆与TNFR1受体特异性结合,有4个克隆与TNFR1受体的结合能力高于野生型序列的rhLT. 将这4个结合力高的突变体克隆于pET32a(+)载体,经过大肠杆菌表达和纯化操作后,检测这些突变体蛋白与TNFR1受体的结合活性和对L929细胞的杀伤活性,发现3个克隆的受体结合性质与其展示于噬菌体上时基本吻合,其中C199克隆与TNFR1的结合活性比野生型序列的rhLT提高了近30%,且其对L929细胞的杀伤活性提高了近90%. 应用噬菌体展示技术对淋巴毒素进行体外进化研究的尝试,为下一步的蛋白质结构和功能研究提供了思路,可成为大分子药物开发的有效工具.

关 键 词：淋巴毒素 随机突变 噬菌体展示 亲和筛选  

分 类 号：Q78]