文献类型：期刊文章

作　　者：史训龙[1] 冯美卿[1] 贺佳音[2] 袁中一[3] 周珮[1]

机构地区：[1]复旦大学药学院生物合成药物化学教研室,上海200032 [2]浙江大学生命科学院生物技术系,杭州310029 [3]中国科学院上海生命科学院生物化学与细胞生物学研究所,上海200031

出　　处：《复旦学报（医学版）》

年　　份：2005

卷　　号：32

期　　号：1

起止页码：71-74

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2004、BIOSISPREVIEWS、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经Sephaciyl S-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果 超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含 的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12 000 U／mi,。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO,50％硫酸铵沉 淀酶回收率可达85％以上。用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化,酶活力回收率最高可达 90％,SDS-PAGE显示单一蛋白条带。结论 本实验方法能得到电泳纯的DAAO,总回收率约为40％。

关 键 词：S-100 细胞 法能  透析  分离纯化 电泳 表达  硫酸铵沉淀 基因工程酵母  D-氨基酸氧化酶

分 类 号：R459.5] Q93[临床医学类]