文献类型：期刊文章

作　　者：孙丙耀[1] PIAO Hai-Long[2] PARK Sung-Han[2] HAN Chang-Deok[2]

机构地区：[1]苏州大学生命科学学院,苏州215006 [2]国立庆尚大学植物分子生物学与生物技术研究中心,韩国晋州660701

出　　处：《生物工程学报》

基　　金：韩国 2 1世纪前沿研究计划作物功能基因组学中心资助项目 (No.CG1613 );国家自然科学基金 (No .3 0 170 5 5 6);江苏省自然科学基金 (No.BK2 0 0 113 9)项目资助~~

年　　份：2004

卷　　号：20

期　　号：6

起止页码：821-826

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2000、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、EBSCO、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：温度非对称交互PCR(TAIL PCR)技术已广泛应用于从多种生物体系克隆侧翼于已知序列的DNA片段的分子操作中 ,并极大地促进了反向遗传学研究。但是 ,可能由于不同物种间基因组大小和序列存在显著差异 ,在采用该技术进行转座元件Ds水稻插入突变体鉴定过程中 ,常因TAIL PCR反应的稳定性差而影响突变体筛选效率。有鉴于此 ,根据Ds核苷酸序列设计了分别对应或互补于Ds插入元件两端长度不同的 12个特异引物组成 32个组合 ,在大量预试验基础上与 6个不同简并性 (32～ 2 5 6 )的随机简并引物分别组合进行TAIL PCR反应 ,较系统地研究了引物特性对以水稻基因组DNA为模板的TAIL PCR反应效率的影响。结果发现 ,第一反应采用长序列特异引物(36～ 4 0mer)可显著提高扩增特异性 ,随机简并引物的简并度对反应的影响显著。还选择出两个适于从水稻Ds插入突变体基因组高效扩增出Ds插入侧翼片段的最优特异引物组合和最适简并引物。应用本研究结果可显著地提高TAIL

关 键 词：随机简并(AD)引物  Ds-特异引物  Ds侧翼序列  水稻 温度非对称交互PCR  

分 类 号：Q943[植物生产类]