文献类型：期刊文章

作　　者：孟瑛[1] 黄绍良[1] 闵军[1] 郭中敏[2] 吴燕峰[1] 包蓉[1]

机构地区：[1]广州中山大学附属第二医院干细胞研究中心,510120 [2]广州中山大学中山医学院实验动物中心

出　　处：《中华肝脏病杂志》

基　　金：国家自然科学基金(30371503)

年　　份：2004

卷　　号：12

期　　号：12

起止页码：714-717

语　　种：中文

收录情况：CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的 探索体外定向诱导胚胎干细胞分化为肝细胞。 方法 常规方法培养E14小鼠胚胎干细胞(ESC)后,进行悬滴(?)悬浮培养,形成胚胎体,再进行分阶段定向诱导,在培养第9-12天、第12-18天以及第15-18天分别加入酸性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子和制瘤素M。利用倒置相差显微镜观察细胞形态变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分析特异性基因mRNA的表达,并用吲哚氰绿(ICG)摄取和过碘酸雪夫反应(PAS)分析细胞的分化及功能。 结果 在诱导培养的第13天,细胞出现肝细胞样改变。RT-PCR分析可见,在诱导的第6天和第12天分别可以检测到内胚层或卯黄囊分化标志基因--甲状腺素运载蛋白和α1抗胰蛋白酶的mRNA表达,第6天出现未成熟肝细胞标志基因--甲胎蛋白mRNA表达,第9天,第15天和第18天分别开始出现成熟肝细胞的特异性标志基因--白蛋白、葡萄糖6磷酸酶、酪氨酸氨基转移酶mRNA表达。同时,ESC源性肝细胞表现为ICG摄取和PAS反应阳性,经过诱导,ICG阳性细胞数约占85.1％。 结论 ESC源性肝细胞具备肝细胞特性,ESC有可能成为肝细胞治疗的替代供体细胞。

关 键 词：成熟肝细胞 MRNA表达 干细胞 ESC 体外定向诱导 基因  摄取  小鼠胚胎 悬浮培养  分化  

分 类 号：R329]