文献类型：期刊文章

作　　者：方玉楷[1] 许丽艳[2] 麦瑞琴 韩溟[2] 牛永东[1] 李恩民[1]

机构地区：[1]汕头大学医学院生物化学与分子生物学教研室,广东汕头515031 [2]汕头大学医学院肿瘤病理研究室,广东汕头515031

出　　处：《中国实验诊断学》

基　　金：国家自然科学基金面上项目 (No .3 990 0 0 69;No.3 0 170 42 8;No .3 0 3 70 64 1) ;广东省自然科学基金重点项目 (No .3 7788) ;广东省自然科学基金面上项目 (990 799;0 10 43 1)

年　　份：2005

卷　　号：9

期　　号：1

起止页码：70-74

语　　种：中文

收录情况：JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的　为了研究蛋白质分子间的相互作用 ,以大T抗原和P5 3为阳性对照 ,建立酵母双杂交实验系统。方法　通过比较共转化、顺序转化和交配实验三种方法的优劣 ,分析了影响酵母转化效率的因素 ,与此同时还分析了酵母体内 β 半乳糖苷酶的活性。 结果　①顺序转化比共转化转化效率高 ;②质粒纯度是影响酵母转化效率的一个主要因素 ,与经典碱裂解法提取质粒相比 ,试剂盒提取质粒的转化效率明显高 ;③PEG浓度对转化效率也有一定影响 ;④β 半乳糖苷酶定量分析能够区分蛋白质分子间的强相互作用与弱相互作用 ,实验结果更可靠。结论　在此基础上 ,我们提出了一种共转化与交配实验有机结合的有效的酵母双杂交新实验策略 ,并将之成功运用于筛选NGAL(neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin ,NGAL)相互作用蛋白实验。

关 键 词：酵母双杂交技术 蛋白质分子相互作用  转化效率  Β-半乳糖苷酶活性

分 类 号：Q781]