文献类型：期刊文章

作　　者：韦相才[1] 钟兴明[1] 郑焕钦[2] 陈观今[2] 王景圆[1]

机构地区：[1]广东省计划生育科学技术研究所,广州510600 [2]中山大学中山医学院病原生物学部,广州510089

出　　处：《中国人兽共患病杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助项目 (3 9970 668)

年　　份：2004

卷　　号：20

期　　号：12

起止页码：1045-1048

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2000、CSCD、CSCD2011_2012、IC、PROQUEST、WOS、核心刊

摘　　要：目的　构建弓形虫膜抗原SAG3基因打靶载体 ,建立基因敲除突变株 ,为进一步探讨SAG3功能和弓形虫侵入宿主细胞机制提供可行的研究方法。方法　用基因克隆方法将SAG31.5 3kb和 2 .81kb两个同源序列分别插入TUB5 /CAT质粒中 ,构建置换型打靶载体 ,氯霉素乙酰转移酶 (CAT)抗性基因作为筛选标记 ,采用电转移转染细胞方法进行基因打靶 ,建立突变型的弓形虫株 ,采用PCR、酶切分析和SouthernBlot杂交方法筛选鉴定。结果　构建了弓形虫RH株 5’SAG3 TUB5 /CAT 3’SAG3置换型载体 ,获得了敲除SAG3基因的弓形虫突变株 ,建立基因敲除突变株 ,获得了阳性的筛选克隆 ,经鉴定证明基因打靶结果准确。结论　通过构建基因打靶载体 ,可有目的地敲除弓形虫膜抗原基因 ,为进一步研究弓形虫侵入机制 ,探讨弓形虫病防治提供可行的方法。

关 键 词：弓形虫 膜抗原 SAG3  基因打靶 载体  

分 类 号：R382.5]