文献类型：期刊文章

作　　者：任启生[1] 陈嫚[2] 宋新荣[1] 冯长根[2]

机构地区：[1]北京江中泽生科技有限责任公司,北京100050 [2]北京理工大学新医药开发研究中心

出　　处：《生物技术》

年　　份：2004

卷　　号：14

期　　号：5

起止页码：6-8

语　　种：中文

收录情况：CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、JST、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的 :研究重组人组织型纤溶酶原激剂突变体 (reteplase,r -PA)基因的克隆和表达 ,并对表达产物进行活性鉴定。方法 :通过PCR的方法从t-PA基因上扩增得到r-PA基因的编码序列 ,并克隆到pUC19载体中 ,经DNA测序正确后 ,将该基因克隆到含有T7启动子的高效表达质粒pJZ - 10 0中 ,转化E .coliBL2 1(DE3) ,得到含有r-PA基因的工程菌。工程菌经IPTG诱导表达 ,SDS -PAGE检测表达情况。提取包涵体 ,经过体外稀释法复性 ,亲和色谱层析纯化 ,测定产物的活性。结果 :表达的重组蛋白约占可溶性总蛋白的 2 0 % ,复性并纯化后测定活性为 5 80 0 0IU mg。结论 :成功构建了重组r-PA的表达质粒 ,表达产物具有良好的生物活性。

关 键 词：重组人组织型纤溶酶原激活剂突变体  克隆 表达  生物活性

分 类 号：Q785]