文献类型：期刊文章

作　　者：杨庆贵[1] 李朝品[1]

机构地区：[1]安徽理工大学医学院病原学与免疫学教研室,安徽淮南232001

出　　处：《免疫学杂志》

基　　金：安徽省自然科学基金资助项目 (0 30 4 330 3)

年　　份：2004

卷　　号：20

期　　号：6

起止页码：472-474

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2000、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的　构建粉尘螨Ⅰ类抗原 (Derf1)cDNA基因的重组表达质粒 ,并于E .coli表达。方法　用BamHⅠ和SacⅠ从重组质粒pMD 18T Derf 1上切下Derf1基因 ,插入表达载体pET32a(+)质粒 ,转化大肠杆菌BL2 1,在氨苄青霉素阳性的LB平板上筛选阳性重组子 ,并经双酶切及PCR扩增鉴定。重组质粒pET32a(+) Derf 1转化大肠杆菌 ,IPTG诱导表达后进行SDS PAGE电泳和薄层凝胶扫描定量分析。结果　对重组质粒进行酶切和PCR鉴定 ,与预期结果相符 ,证明已成功构建携带Derf1基因的重组原核表达质粒pET32a(+) Derf 1。核酸序列测定及同源性分析证实所构建的原核表达质粒pET32a(+) Derf1中所含的Derf1基因与GenBank中的Derf1序列同源性达到 99.5 %。Derf 1基因在大肠杆菌诱导表达后获得Mr 约4 5 0 0 0的蛋白 ,蛋白含量占全菌体蛋白含量的 15 %。结论　成功构建了粉尘螨Ⅰ类抗原cDNA基因的重组表达质粒pET32a(+) Derf 1,并在大肠杆菌中获得高效表达 ,为获得重组纯化Derf

关 键 词：粉尘螨 抗原 CDNA 基因重组 原核表达

分 类 号：R392]