文献类型：期刊文章

作　　者：彭建强[1] 董小岩[2] 彭忞[2] 陈立[3] 谭淑萍[2] 袁洪[4] 陈方平[1] 薛京伦[3] 吴小兵[2]

机构地区：[1]中南大学湘雅医院血液科,长沙410078 [2]国家863计划生物领域病毒基因载体研发基地 [3]复旦大学生命科学学院遗传学研究所遗传工程国家重点实验室 [4]中南大学湘雅三医院

出　　处：《中华血液学杂志》

基　　金："八六三"高科技发展计划基因治疗重大关键技术资助项目 (863 BH0 3 0502 )

年　　份：2004

卷　　号：25

期　　号：9

起止页码：513-518

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2000、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的　制备携带人凝血因子Ⅸ (hFⅨ )基因的重组AAV2病毒 (rAAV2 /hFⅨ ) ,并对用rAAV2 /hFⅨ肌肉注射治疗血友病B模型小鼠的疗效进行评价。方法　通过“一株载体细胞 /一株辅助病毒”的双因素包装策略制备出rAAV2 /hFⅨ ,体外转导BHK 2 1、C2C12细胞后 ,检测细胞培养上清中hFⅨ的表达量 ;肌肉直接注射血友病B模型小鼠后 ,检测其血浆中hFⅨ的抗原水平和凝血活性等指标。结果　转导 2 4h后在细胞上清中即可检测到hFⅨ ,连续检测 12 0h都有表达 ,BHK 2 1、C2C12细胞 2 4h最高表达量分别达到 (5 1.0± 6 .5 )ng/ 10 5细胞和 (6 8.0± 7.2 )ng/ 10 5细胞。rAAV2 /hFⅨ经肌肉直接注射后 ,高、中、低三个剂量组均能检测到小鼠体内高效表达hFⅨ ,在给药后第 3周达到高峰 ,小鼠血浆中hFⅨ的表达量与对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ,之后缓慢下降 ,到第 10周仍可检测到低水平hFⅨ表达 ;取第 3周小鼠血浆样品检测凝血功能 ,高、中、低剂量组FⅨ活性均得到明显改善 ,小鼠的割尾实验出血时间明显缩短 ,5min失血量也相应显著减少 ,其中高剂量组hFⅨ最高表达量达到 (387.0± 12 .5 )ng/ml血浆 ,FⅨ活性达到正常水平的 (30 .0± 5 .5 ) % ;给药后第 10周 ,除在注射点外 ,其它主要脏器均未检测到AAV载体DNA。

关 键 词：血友病B 血浆  模型小鼠 基因治疗 表达量  C2C12细胞 转导 高效表达  凝血因子Ⅸ  高表达  

分 类 号：R554.1] R285.5]