文献类型：期刊文章

作　　者：王卫国[1] 娄思权[1] 佘华[2] 夏家辉[2]

机构地区：[1]北京大学第三医院骨科,100083 [2]中南大学中国医学遗传学国家重点实验室

出　　处：《中华骨科杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(39970744)

年　　份：2003

卷　　号：23

期　　号：7

起止页码：434-438

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2000、CAB、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD2011_2012、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的观察人关节软骨细胞在体外单层培养过程中的去分化,以及转染TGF-β2在关节软骨细胞内的表达和对去分化的抑制作用。方法从手术中切除的软骨组织中分离培养成人关节软骨细胞,通过脂质体介导的方法将已构建的pcDNA3.1(+)/TGF-β2转染到体外单层培养的软骨细胞中。采用RT-PCR、ELISA、组织学染色、免疫组化和原位杂交的方法,分别对转染组和未转染组的第1、6、9代细胞进行检测,比较目的基因表达、软骨细胞形态以及胶原和多糖生物合成的差异。结果经多次传代后,未转染软骨细胞在体外单层培养过程中逐渐走向去分化,TGF-β2、Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚糖体的表达逐渐减低,而Ⅰ型胶原的表达增高。目的基因在转染组各代软骨细胞内均得到表达,转染后细胞保持软骨细胞的形态,Ⅱ型胶原和蛋白多糖聚糖体表达虽有降低,但均高于未转染的同代细胞,而Ⅰ型胶原表达增高的程度低于未转染细胞。结论人关节软骨细胞在体外单层培养中有去分化趋势;pcDNA3.1(+)/TGF-β2真核表达载体转染人关节软骨细胞获得成功,在转染后关节软骨细胞内稳定表达,并对软骨细胞的去分化有抑制作用。

关 键 词：转染TGF-β2  关节软骨细胞 RT-PCR ELISA 组织学染色  免疫组化  原位杂交 去分化

分 类 号：R318.0[生物医学工程类]