文献类型：期刊文章

作　　者：李大为[1] 肖春玲[1] 关艳[1]

机构地区：[1]中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室,北京100050

出　　处：《中国医学科学院学报》

基　　金：科技部重大专项基金(2002AA2Z343D);北京市自然科学基金(7032036)资助~~

年　　份：2004

卷　　号：26

期　　号：4

起止页码：368-371

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2000、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 构建在大肠杆菌中高效表达结核杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶(ICL)的重组质粒,实现ICL在原核表达系统的高效稳定表达。方法 采用PCR和克隆技术构建含有结核杆菌H37TRy ICL基因的表达质粒pET30(a)-Rv0467,转化至E.coli BL21(DE3)中诱导表达。目的蛋白经金属螯合层析纯化后,对其活性进行初步研究。结果 构建了高效表达结核杆菌H37Rv ICL的质粒;在E.coli BL21(DE3)中得到高效表达,目的蛋白占总蛋白含量的30％;表达产物以可溶性形式存在,通过金属螯合层析纯化,所得酶的纯度为90％;目的蛋白具有ICL的活性。结论 利用原核表达系统成功克隆表达了结核杆菌H37Rv的ICL,为以ICL为靶点建立新型抗结核药物奠定了基础。

关 键 词：异柠檬酸裂解酶  结核杆菌H37Rv  克隆 基因表达

分 类 号：Q786]