文献类型：期刊文章

作　　者：邵世和[1] 王媛[1] 严杰[2]

机构地区：[1]北华大学医学院医学检验系,吉林132001 [2]浙江大学医学院病原生物学教研室,杭州310031

出　　处：《中国人兽共患病杂志》

基　　金：国家教育部优秀年轻教师基金;浙江省科技厅资助

年　　份：2004

卷　　号：20

期　　号：7

起止页码：585-588

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2000、CSCD、CSCD2011_2012、IC、PROQUEST、WOS、核心刊

摘　　要：目的　克隆幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)临床菌株的cagA基因片段 ,构建原核表达系统 ,鉴定重组表达产物的免疫原性。方法　由于cagA基因核苷酸序列变异较大 ,选择序列相对稳定的 2 14 8bp为目的片段 (cagA1)。采用高保真PCR扩增幽门螺杆菌临床分离菌株Y0 6中的目的片段cagA1,T -A克隆后测序。构建 pET32a的cagA1片段表达载体 ,在E coliBL2 1DE3宿主菌中用不同浓度的IPTG诱导表达。采用Ni-NTA亲和层析法收集表达的目的重组蛋白 (rCagA1)。采用Hp全菌抗体的Westernblot鉴定rCagA1免疫反应性 ,免疫双扩散试验鉴定rCagA1免疫家兔的抗血清效价。 结果　PCR获得预期大小的目的扩增条带。与文献报道比较 ,克隆的cagA1核苷酸和氨基酸序列同源性分别为 94 83%和93 30 %。所构建的原核表达系统 pET32a -cagA1-E coliBL2 1DE3目的重组蛋白 (rCagA1)表达量为细菌总蛋白的 30 %左右。Westernblot证实rCagA1能与Hp全菌抗体发生特异性免疫结合反应。兔抗rCagA1血清的免疫双扩散效价为 1∶4。结论　本文成功地构建了HpcagA基因片段cagA1的高效原核表达系统 ,所表达的rCagA1具有良好的免疫原性和免疫反应性 ,为进一步研制cagA及其抗体检测试剂盒奠定了基础。

关 键 词：幽门螺杆菌 cngA基因  克隆 表达  免疫原性

分 类 号：R378.2]