文献类型：期刊文章

作　　者：冉延超[1] 王一飞[1] 熊盛[1] 张美英[1] 黄文韬[1] 罗林波[1] 刘秋英[1]

机构地区：[1]广州暨南大学生物医药基地,广东广州510632

出　　处：《中国病理生理杂志》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30371661);广东省科技厅科技攻关重大专项(A1090207);广州市科委重大攻关项目(99-Z-007-01);暨南大学自然科学基金资助项目(692002)

年　　份：2004

卷　　号：20

期　　号：6

起止页码：954-959

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2000、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的 :为提高表达量 ,简化纯化工艺 ,获得可用于临床研究的重组人NDPK -A蛋白 ,构建带有 6×His纯化标签的原核表达载体 ,优化表达条件获得产物高表达并鉴定产物活性。方法 :将抑癌基因nm2 3-H1从质粒pBVNMH1中亚克隆于带有纯化标签的表达载体pQE4 0中 ;梯度变化表达条件获得产物高表达 ;镍离子螯合层析柱纯化目的蛋白 ;Westernblot鉴定产物的免疫原性 ;HPLC测定产物的激酶活性 ;鸡胚尿囊膜试验鉴定产物抑制血管新生的生物活性。结果 :pQE - 4 0中亚克隆的nm2 3-H1序列无误 ;目的蛋白最高表达量可达 4 9 6 % ;纯化的表达产物能与天然NDPK -A的多克隆抗体特异结合 ;酶比活为 4 72U/mg ;具有抑制鸡胚尿囊膜血管新生的活性。结论 :表达质粒pQE -nm2 3H1能高效表达重组人NDPK -A ,纯化工艺简便 ,产物活性与天然NDPK -A无异。

关 键 词：核苷二磷酸激酶 肿瘤抑制蛋白质类

分 类 号：R363]