文献类型：期刊文章

作　　者：李宗菊[1] 熊丽[2] 桂敏[2] 李金泽[2] 刘小莉[1] 刘飞虎[1]

机构地区：[1]云南大学生物技术系,云南昆明650091 [2]云南省农业科学院园艺研究所,云南昆明650205

出　　处：《云南植物研究》

基　　金：云南省科技攻关项目资助 (2 0 0 1;NG13)

年　　份：2004

卷　　号：26

期　　号：4

起止页码：439-444

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2000、CSCD、CSCD2011_2012、核心刊

摘　　要：以改良的CTAB法为基础 ,对非洲菊基因组DNA提取进行了下述优化 :在第二次用氯仿 异戊醇抽提时 ,加入“PCN”溶液 (0 0 6 75gPVP ,4 5 μl 10 %CTAB +4%NaCl) ,可明显去除多糖 ;在材料研磨时加入化学物质M (0 10 0 0gNa2 SO3 ,0 0 5 0 0gVC)及N (0 0 2 0 0gVE ,0 10 0 0gNa2 B4O7,0 0 2 0 0gPVP ,2 0 0 μlβ -巯基乙醇 ) ,都可去除酚类物质 ,明显提高DNA及ISSR PCR扩增的质量 ,但N的效果稍优于M ;同时加入M、N及“PCN” ,具有明显的优化效果 ,所提 5个样品DNA ,平均A2 6 0 A2 80、A2 6 0 A2 30分别为 1 81、 2 0 2 ,浓度为 0 6 49μg μl,片段大小约为 4 9kb ,ISSR扩增带多且清晰、明亮、稳定性及多态性高 ,表明DNA纯度很高。对扩增反应的最佳模板浓度进行研究表明 ,所提DNA模板必须稀释 30倍 (浓度为 15～30ng μl时 ) ,才能扩增出清晰的谱带。

关 键 词：非洲菊 DNA提取 模板浓度  

分 类 号：S682.1]