文献类型：期刊文章

作　　者：朴君[1] 武翼[1] 朴敬爱[1] 李文哲[2]

机构地区：[1]辽宁师范大学生命科学学院,大连116081 [2]大连大学免疫学研究所,116622

出　　处：《免疫学杂志》

基　　金：国家自然科学基金(30972675;31270864);大连市科技计划项目(2010J21DW011)

年　　份：2013

卷　　号：29

期　　号：2

起止页码：156-160

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2011、CAB、CAS、CSA、CSCD、CSCD2013_2014、IC、JST、RCCSE、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的构建并表达血管内皮细胞黏附分子(VCAM-1)胞外区基因真核表达载体。方法从小鼠NIH/3T3细胞提取总RNA,以其为模板通过RT-PCR扩增VCAM-1胞外区(D1-D4结构域)cDNA。利用PCR获得VCAM-1胞外区基因,连接pMD19-T载体,进行基因序列测序。将VCAM-1 D1-D4目的片段插入到真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Nuc中,构建重组真核表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1。经双酶切鉴定VCAM-1胞外区基因真核表达载体构建的成功与否。利用脂质体把pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1导入至人B淋巴性白血病细胞株(Raji)内。结果基因测序结果表明成功扩增出VCAM-1胞外区基因,双酶切鉴定表明重组的真核表达质粒pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1构建成功。Western blot结果显示导入pIRES2-AcGFP1-Nuc-VCAM-1质粒的Raji细胞中VCAM-1高表达。细胞结合实验表明,表达的VCAM-1与前B细胞(70Z/3)表面的VLA-4特异性结合。结论 VCAM-1真核表达载体构建及表达成功,为前B细胞克隆形成机理以及为B细胞分化发育研究提供实验依据。

关 键 词：血管内皮细胞黏附分子  真核表达载体 真核表达

分 类 号：R392.11]