文献类型：期刊文章

作　　者：李桂敏[1] 宁保安[1] 白家磊[1] 赵丽[1] 赵翠娇[1] 高志贤[1]

机构地区：[1]军事医学科学院卫生学环境医学研究所,天津市环境与食品安全风险监控技术重点实验室,天津300050

出　　处：《食品安全质量检测学报》

基　　金：国家科技支撑计划项目(2011 BAK10B02-13)~~

年　　份：2014

卷　　号：5

期　　号：3

起止页码：956-963

语　　种：中文

收录情况：AJ、CAB、CAS、DOAJ、JST、RCCSE、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：目的：制备地西泮(diazepam, DZP)单克隆抗体,并且对制备的抗体进行一系列性质鉴定。方法利用1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐[1-ethyl-3-(3-dimethyllaminopropyl) carbodi imide hydrochloride, EDC·HCl]法合成免疫原和包被原,用免疫原免疫Balb/C小鼠,当效价到1：16000以后取小鼠脾脏与SP2/0进行细胞融合。然后采用竞争结合双阳性两步筛选法,筛选出能分泌特异性抗体的杂交瘤细胞,并且利用有限稀释亚克隆方法得到单株细胞,采用体内诱生法制备腹水型单克隆抗体。利用辛酸-饱和硫酸铵法对腹水型抗体进行纯化,利用酶联免疫吸附法、表面等离子共振仪(surface plasmon resonance, SPR)等方法对纯化后的抗体进行性质鉴定。结果成功合成了地西泮免疫原和包被原,免疫Balb/C小鼠7次后效价达到1：16000,最终制备出单克隆抗体,抗体解离常数(dissociation constants, KDs)为4.0985×10-7 mol/L,且与大部分结构类似物没有明显的交叉反应。应用此抗体建立间接竞争ELISA法,抗体的IC50=10.8 ng/mL,检测范围为0.45~862.00 ng/mL。结论本研究制备出了地西泮单克隆抗体,为地西泮的免疫学检测提供了有力的支持。

关 键 词：地西泮 杂交瘤技术 单克隆抗体 酶联免疫吸附法

分 类 号：TQ463[化工与制药类]