文献类型：期刊文章

作　　者：邢小康[1] 何继亮[2] 陈智[1]

机构地区：[1]浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治国家重点实验室,浙江杭州310003 [2]浙江大学医学院环境医学系,浙江杭州310058

出　　处：《浙江大学学报（医学版）》

基　　金：国家"十二五"科技重大专项(2012ZX10002-003);浙江省科技计划项目(2009C03011-2)

年　　份：2011

卷　　号：40

期　　号：6

起止页码：582-587

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、EMBASE、IC、JST、PUBMED、RCCSE、SCOPUS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的:探讨siRNA能否有效抑制丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞中HCV的复制。方法:用HCV JC1质粒体外制备HCV RNA转录体,转染Huh-7.5.1细胞,收集细胞上清,再次孵育Huh-7.5.1细胞以建立HCV感染细胞模型,并用间接免疫荧光检测细胞内HCV核心蛋白的表达。将针对HCV NS5B基因的siRNA转染HCV感染细胞(浓度为4、40和200 nmol/L,时间为24 h、48 h和72 h),将4、40和200 nmol/L siRNA转染正常Huh-7.5.1细胞,并设空白对照、脂质体对照、无关siRNA对照以及IFNα-2b(1 000 IU/ml)组,用荧光定量PCR检测细胞内HCV RNA和PKRmRNA水平。结果:HCV感染的Huh-7.5.1细胞中检测出HCV核心蛋白表达。40 nmol和200nmol/L siRNA 24 h组及4、40、200 nmol/L siRNA 48 h和72 h组,HCV RNA水平分别降至58%、54%、29%、17%、17%、33%、22%、19%,明显低于对照组(P<0.05或P<0.01)。1 000 IU/mlIFN的各时间组HCV RNA水平均明显低于对照组(P<0.05或P<0.01)。各浓度siRNA组的PKR mRNA的表达与对照组无明显差异(P>0.05)。结论:针对HCV NS5B区的siRNA能够明显抑制HCV感染细胞中HCV的复制,而不引起双链RNA依赖的蛋白激酶(PKR)基因表达的激活。

关 键 词：肝炎病毒属/遗传学  RNA,小分子干扰/遗传学  丙型肝炎  RNA干扰  小干扰RNA(siRNA)  HCV复制 NS5B 感染细胞

分 类 号：R512.63]