文献类型：期刊文章

作　　者：杨瑞[1] 李小英[1] 王天云[2]

机构地区：[1]新乡医学院生命科学技术系 [2]新乡医学院基础医学院生物化学教研室,河南新乡453003

出　　处：《生物技术》

基　　金：国家自然基金项目(No.30970055);河南省教育厅自然科学基金项目(2007330003)资助

年　　份：2011

卷　　号：21

期　　号：6

起止页码：39-43

语　　种：中文

收录情况：BDHX、BDHX2008、CAS、CSCD、CSCD_E2011_2012、核心刊

摘　　要：目的:探讨多样本、多基因的单核苷酸突变基因分型操作的PCR-SSP的最优参数,建立最佳反应体系。方法:优化PCR-SSP反应中扩增体系参数,选取优化后的参数做为反应体系;在反应体系已优化的条件下,分别优化解链温度、循环参数。结果:优化后Mg2+、dNTPs、Taq酶、序列特异性引物、内对照引物、DNA模板在20μL反应体系中的终浓度分别为:3.75μmol/L、0.5m mol/L、2.5U、0.5μmol/L、0.2μmol/L、0.15μg;采用改良的TouchDown做为循环参数,其中DNA变性时间至15min,增加5个起始循环。结论:成功建立了PCR-SSP反应的快速操作体系,扩增条带清晰,普通、琼脂糖凝胶电泳即可检测单核苷酸突变基因型。优化后的体系适合对人、小鼠等各类型DNA样本进行快速多基因单核苷酸多态性分型。

关 键 词：单核苷酸突变  基因型 序列特异性扩增酶链反应  

分 类 号：Q81[生物工程类]