文献类型：期刊文章

作　　者：高凯[1] 王军志[1] 饶春明[1] 吴小兵[2]

机构地区：[1]中国药品生物制品检定所,北京100050 [2]国家863计划生物领域病毒基因载体研发基地,北京100176

出　　处：《药学学报》

基　　金：国家 8 63"十五"计划主题项目(2 0 0 1AA2 15 0 71);首都二四八重大创新工程生物医药领域资助项目(H0 10 2 10 170 113 )

年　　份：2003

卷　　号：38

期　　号：9

起止页码：684-689

语　　种：中文

收录情况：AJ、BDHX、BDHX2000、BIOSISPREVIEWS、CAB、CAS、CSCD、CSCD2011_2012、DOAJ、EMBASE、IC、IPA、JST、PUBMED、RCCSE、RSC、SCOPUS、WOS、ZGKJHX、核心刊

摘　　要：目的　研究并建立重组腺相关病毒 2型 人凝血因子IX(recombinantadeno associatedvirustype 2 humanbloodcoagulationfactorIX ,rAAV 2 hFIX)的质量标准。方法　采用PCR法确认病毒所携带的重组核酸结构和测定辅助病毒(helpervirus)和野生型腺相关病毒 (wtAAV)的残留片段。SDS PAGE电泳测定病毒外壳蛋白分子量及纯度 ,TSKgelSP NPR阳离子交换柱系统测定病毒颗粒纯度。以斑点杂交法测定病毒颗粒数。一期法于IX因子基因剔除小鼠体内测定rAAV 2 hFIX生物学活性 ,并通过ELISA法测定感染BHK 2 1细胞后hFIX的表达量。结果　PCR法确证病毒的重组核酸结构与构建预期相同 ;在 1× 10 7VG的rAAV 2 hFIX颗粒中 ,残留辅助病毒的基因片段数少于 1个拷贝 ;在 1×10 8VG的rAAV 2 hFIX颗粒中 ,野生型AAV 2基因片段数少于 1个拷贝。病毒颗粒及外壳蛋白纯度均大于 98% ,病毒颗粒数大于 1 0× 10 1 5VG·L- 1 (virusgenome·L- 1 )。IX因子剔除小鼠肌肉注射病毒后 2 1d ,小鼠血液中人凝血因子IX活性达到大于正常人因子IX活性的 15 % ,IX因子的体外表达水平大于 2 0 0 μg·L- 1 。其他各项检测指标均符合规定。结论　建立了rAAV 2 hFIX的质量标准 。

关 键 词：基因治疗 腺相关病毒 人凝血因子 质量控制  

分 类 号：R927[药学类]