文献类型：期刊文章

作　　者：李建平[1] 熊祺琰[1] 陈庆梅[1] 吴洁[1] 曹荣月[1] 刘景晶[1]

机构地区：[1]中国药科大学生命科学与技术学院微基因药物实验室,江苏南京210009

出　　处：《药物生物技术》

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.30500458)

年　　份：2007

卷　　号：14

期　　号：3

起止页码：157-163

语　　种：中文

收录情况：AJ、CAS、CSA、CSA-PROQEUST、CSCD、CSCD_E2011_2012、EMBASE、IC、SCOPUS、ZGKJHX、普通刊

摘　　要：为了增强多肽表位的免疫原性,构建了霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin B subunit,CTB)和p277的融合基因CTB-p277,将该融合基因克隆到pET28a(+)中,获得原核表达载体pET28a-CTB-p277;并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经2%的乳糖诱导5 h后的表达产物用12%的SDS-PAGE分析表明可以表达融合蛋白,融合蛋白占全菌蛋白约40%,且主要以包含体的形式存在。包含体经洗涤、裂解,用DEAE纤维素离子交换纯化,可以获得99.1%的重组蛋白。重组蛋白的包含体经复性后,在体外可以自组装成五聚体。重组蛋白免疫KK-Ay小鼠后,ELISA的分析表明可以产生抗p277的抗体。血糖和体重的测定结果显示,给药组小鼠的血糖有明显的降低,体重也有相应的减轻。同时GM1-ELISA的检测表明,CTB-p277在体外可以和神经节苷脂GM1(Monosialoganglioside)特异结合,具有生物活性。

关 键 词：霍乱毒素B亚单位 多肽p277  纯化  包含体 免疫分析 神经节苷脂GM1

分 类 号：Q7]