文献类型：会议

作　　者：张充 周孝伟 吕凤霞 别小妹 陶婷婷 应琦 陆兆新

作者单位：南京农业大学食品科技学院酶工程研究室，江苏南京210095 南京农业大学食品科技学院酶工程研室，江苏南京210095

会议文献：第八届中国酶工程学术研讨会论文集

会议名称：第八届中国酶工程学术研讨会

会议日期：20111001

会议地点：广州

主办单位：中国微生物学会

出版日期：20111001

语　　种：中文

摘　　要：克隆鱼腥藻PCC7120基因组中脂肪氧合酶(ana-LOX)基因，对该功能基因进行了定点突变研究，确定了ana-LOX的最短功能基因长度，构建原核重组表达载体，对重组ana-LOX进行了分离纯化和性质研究。从GenBank中搜索到鱼腥藻PCC7120基因组中含有LOX基因，通过序列分析和比对，发现LOX功能基因位于双功能酶AOS(单加氧酶)-LOX的C端，通过定点突变研究，证实了ana—LOX活性中心位点为Hisl97、His202、His369、Asn373和Ile455。通过逐步缩短基因长度的策略，获得ana-LOX基因的最短功能基因长度为1254 bp。构建的表达载体pET-32a/ana-LOX转化入BL21(DE3)宿主内，在低温16℃条件下的诱导表达，重组脂肪氧合酶活力可达6750 u／mL。表达产物通过Ni-NTA亲和柱进行分离纯化，比活达到11.4x104 u／mg蛋白，酶活回收率为60.89％。重组ana-LOX最适反应温度45℃，最适反应pH6.O，在常温下具有较好的稳定性，金属离子Fe2+，M92+、ca2+对该酶存在明显的激活作用，而Fe3+和cu2+对该酶有强烈的抑制作用．重组ana-LOX能够改善面团的显微结构．该研究获得了高效表达重组ana—Lox，为实现其在食品加工中的应用提供了参考。

关 键 词：脂肪氧合酶 克隆表达 定点突变 分离纯化 活性分析

分 类 号：Q814[生物工程类]