文献类型：会议

作　　者：赵战勤 程相朝 王臣 丁轲 张春杰 李银聚 刘一尘 吴庭才

作者单位：河南科技大学动物科技学院 动物病原微生物实验室 洛阳 471003

会议文献：中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会论文集

会议名称：中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病学术研讨会

会议日期：20100100

会议地点：郑州

主办单位：中国畜牧兽医学会

出版日期：20100100

语　　种：中文

摘　　要：本研究通过百日咳杆菌黏附素(PRN)基因的分段克隆表达及其在BALB/c小鼠的主动和被动免疫保护试验筛选PRN中的保护性抗原肽。利用大肠杆菌进行PRN的完整蛋白、N端和C端多肽及其RJ和RII区域多肽(双拷贝)的表达，命名为GST-PRN、GST-PN、GST-PC，GST-2PRJ和GST-2PRII通过SDS-PAGE分析，发现经大肠杆菌BL21表达的各重组蛋白分子量分别为96、66、57、50和51kDa，是PRN及其各片段与GST的融合蛋白。 经Bio-Rad Quantity One program分析，各重组蛋白和GST载体蛋白的表达量分别占菌体总蛋白的61.4％、69.2％、59.3％、44.7％、61.3％和32.8％，提取后的纯度分别为92.4％、95.2％、94.4％、88.3％、84.7％和91.5％。Western blot检测证实5种表达产物均具有良好的反应原性。在主动免疫保护试验中，5种表达产物均能诱导小鼠产生较高的PRN抗体水平;当使用3 LD50的支气管败血波氏杆菌(Bb)强毒株HH0809进行鼻腔攻击后，GST-2PRI的保护率为66.7％(6/9)，其余4者的保护率均为100％(9/9);当使用10 LD50的HH0809攻击时，其保护率分别为77.8％(7/9)、33.3％(3/9)，66.7％(6/9)，10％(1/10)和60％(6/10)。在被动免疫保护试验中，当使用10 LD50的HH0809进行腹腔攻击时，GST-2PI抗血清对小鼠的保护率为20％(2/10)，其余4者的保护率均为100％(10/10);但经天然PRN吸附后的5种兔抗血清均无任何保护力(0/5)。本研究表明PRN的N端和C端表达多肽均具有较强的针对Bb的保护力，且C端强于N端;而C端RII区域的保护力也显著强于N端RI区域。

关 键 词：支气管败血波氏杆菌 百日咳杆菌黏附素  保护性抗原 卵圆形短小杆菌  

分 类 号：S852.612]