文献类型：会议

作　　者：崔晓燕 邱素华 贾庆忠 许彦芳

作者单位：河北医科大学药理教研室,河北医科大学新药安全评价研究中心,石家庄050017

会议文献：2018年第八届药物毒理学年会论文集

会议名称：2018年第八届药物毒理学年会

会议日期：20180511

会议地点：南京

主办单位：中国药学会;中国药理学会

出版日期：20180511

语　　种：中文

摘　　要：目的：药物阻断心脏hERG钾通道是QT间期延长(LQT)从而引发心律失常的重要分子机制,因此ICH的S7B及我国"药物QT间期延长潜在作用非临床研究技术指导原则"要求检测创新药物对hERG钾通道的阻断作用.小分子酪氨酸激酶抑制剂类(TKIs)抗肿瘤药物是目前新药研发热点,然而此类药物临床引发LQT,严重者导致心源性猝死,但此类药物临床所致LQT与其临床前评价中对hERG通道的阻断并不平行.鉴于心肌细胞内酪氨酸激酶通过PI3K-SGK1信号通路对离子通道转录后的可能调节,本研究选用 Erlotinib、Imatinib、Nilotinib、Vandetanib 四个 TKIs 验证以下假设：TKIs 抑制酪氨酸激酶下游的PI3K-SGK1信号通路,减少细胞膜上hERG通道数量,以短链鞘磷脂C4-ceramide(CER)激活SGK1可对抗TKIs对hERG通道的抑制.方法：(1)稳态转染hERG的HEK293细胞上常规全细胞膜片钳技术记录药物对hERG电流的影响;(2)Western-blot检测慢性孵育药物后135、155-kDa(分别代表非成熟、成熟通道)蛋白的表达量;(3)利用全自动细胞场电位实时监测技术(xCELLigence RTCA),在人诱导多潜能干细胞分化的心肌细胞(iPS-CM)观察药物对细胞场电位振幅(Field potential amplititude,FPAmp)及动作电位时程(Field potential duration,FPD)的影响.结果：(1)四种TKIs呈浓度依赖式急性阻断hERG钾通道,减小电流幅值,慢性孵育24小时后电流的抑制较急性作用更加显著;Westernblot分析显示慢性孵育可浓度依赖性减少细胞膜成熟通道蛋白(155-kDa)表达水平.(2)细胞膜蛋白数量取决于正向转运与内化、降解的平衡,借助工具药物分析TKIs减少细胞膜上通道蛋白的机制.我们发现Imatinib、Vandetanib可以时间依赖性的、不同程度的促进细胞膜成熟通道蛋白(155-kDa)的内化、降解.(3)CER(1、3、6μM)可浓度依赖性对抗TKIs所致膜hERG钾通道155-kDa蛋白表达量的减少;同时,CER与四个TKIs共同孵育24h可有效预防TKIs对hE

关 键 词：S7B  TKIs  hERG 钾通道  CiPA  IPS-CM  

分 类 号：R9[药学类] R97